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银杏组织培养方法

发布日期:2012-01-04  来源:明升mansion88  作者:   浏览次数:27

利用植物的4部分,如茎尖等,在适宜的条件下培养,使育成具有完整根茎叶的植株,称之为组织培养,或称微体繁殖。现在已经做过的组织培养试验,主要有茎尖培养和幼胚培养两大类。茎尖培养,要从所要繁殖的银杏植株的中上部采集长枝,剪除叶片和叶柄,用湿润纱布包置后拿回室内,依次用蒸馏水、漂白粉液、蒸馏水、升汞水、蒸馏水反复冲洗,然后,在无菌条件下,切下约0.5厘米长的茎尖,最后将茎尖接种在预先准备好的培养基上,管口加盖,以防止污染。用于组培的芽尖,可以是顶芽,也可以是侧芽。考虑到银杏树的组织,具有明显的部位效应,一般不宜采集向外伸展的横向枝条的芽作为组织培养的材料。茎尖培养所用的培养基,一般用经过改良的W11ite培养基来诱导愈伤组织和胚茎,用N6为基础的生根培养基,来促进生根。改良White培养基的组成是White培养基+BA0.5一1.0+NAA0.5+NH415.34+白糖4%。生根培养基的组成是,N6+2,4—D3+BAl+NAAl+白糖3%+琼脂0.5克。(以上浓度单位,除白糖琼脂外,均为每公升溶液内的毫克数)

培养条件是:温度25—29摄氏度。先作一周暗培养,以形成愈伤组织。从第八天起,转移到自然散射光下再培养一周,以促进胚茎的分化。这时,可见到两种叶芽。一种为簇生型,另一种为单生型。选择单生性芽形成的茎段,转移到生根培养基上,作继代繁殖。三周后,即可逐步长出根系,形成完整的银杏植株。据M88试验,在不加2,4——D而添加NH4cl的white培养基上,银杏茎尖组织的芽诱导率为3.1%,有时甚至还能由这种培养基诱导生根。幼胚培养,主要用于抢救一些还未充分成熟或因其他种种原因一般情况下无法长成新的植株的杂种胚或异常发育胚,有利于保存新的基因型后代。具体做法是:先除去银杏骨质中种皮,种仁(这里实际是胚乳)用70%的酒精消毒2—3分钟,再放入0.1%升汞水溶液中拍气减压灭菌20分钟,然后再用无菌水漂洗3次。在无菌条件下挑出种胚,再将胚整体或切成几段并用灭菌滤纸吸干水分后,分别接种在试管内的琼脂培养基面上。用作幼胚培养的培养基,以N6和MS为基本培养基,有利于愈伤组织形成,10—15天后在胚轴切口处就会形成芽常用的三种生芽培养基的组成是:

N6+KTl+NAAl+白糖3%+琼脂0.5%

MS+BA3+NAA0.5+白糖3%+琼脂0.5%

MS+2,4—D2+IH300+白糖3%+琼脂0.5%

把有芽的胚培养块转入White+2,4—D2+NH‘C15.34+IH300+白糖4%+活性碳0.05%+琼脂0.5%的培养基上,6一10天后,就能从芽上长出根,形成完整的小植株。具体培养条件是:温度保持在25摄氏度左右,M88上下不要超过2摄氏度。分化培养阶段,采用40瓦日光灯、白天照光10小时,夜间保持黑暗。待幼苗长出4—7张叶片时,再切成2—3段,作断代培养,生芽后转入生根培养基。中国科学院植物研究所等,曾采用蜂乳作培养基培育银杏幼胚,也取得了成功。可见,只要有适当的激素类物质存在,又有细胞分裂增殖所必须的营养物质,都可以保证银杏胚的正常发育。